बोवाइन वायरल डायरिया वायरस एंटीबॉडी एलिसा किट

बिनाई

 

परीक्षण प्रक्रिया एवं व्याख्यान

 

चरण 1 परीक्षण प्रक्रिया

1.1 वाश समाधान तैयारी म

Wयोग्य एकाग्रता wलाश तरल:उपयोग से पहिले धोवै के घोल का कमरा के तापमान (20-25 डिग्री) मा बहाल करै का चाही अउर समान रूप से हिलावा जाय जेहिसे कि ई एक समान बनावा जाय। तब 20 बार पतला पानी के साथ केंद्रित धोने का घोल (उदाहरण के लए, 95ml शुद्ध पानी म 5ml केंद्रित वाशिंग समाधान जोड़ा जात है), अच्छा से मिलाया जात है, और पतला धोने के तरल पदार्थ 7 दिन तक 2-8 डिग्री पर संग्रहीत किया जा सकत है।

1.2 नमूना तैयारी

① थोक पशु खून लीन गा, 10 मिनट तक 4000rpm पर सेंट्रीफ्यूज कीन गा, अउर सुपरनेटेंट एकत्रित कीन गा। सीरम को भी हेमोलिसिस के बिना प्राकृतिक रूप से सहगंबद्ध किया जा सकत है।

② सीरम नमूना 1:50 (3ul सीरम नमूना को 147ul नमूना पतला को जोड़ें) को पतला कर और पूरी तरह से म से मल।

नोट: नकारात्मक अउर सकारात्मक नियंत्रणन का भी पतला करै के जरूरत है।

1.3 एंजाइम संयुग्मित तैयारी

एंजाइम संयुग्मित 1:250 (2ul enzime संयुग्मन (x100) से 498ul नमूना पतला जोड़ें) को पतला करें और अच्छी तरह से मिश्रण करें।

1.4 परीक्षण प्रक्रिया

① एंजाइम लेबल को माइक्रोप्लाट (प्रमूलों के संख्या के अनुसार, कई बार डिसएसेम्बल किया जा सकत है और उपयोग किया जा सकत है), एंजाइम लेबल मा 100ul 100ul जोड़ सकत हैं माइक्रोप्लाट मा दुइ कुंआ का 100ul हर एक सेट करत हैं, अउर क्रमशः प्रतिक्रिया मा नकारात्मक अउर सकारात्मक नियंत्रण के लिए 100ul प्रत्येक जोड़ें। धीरे से नमूना कुअँम मा हिलावा, सीलिंग प्लेट फिलिम का इस्तेमाल कइके प्लेट का कवर करै, अउर 37 डिग्री मा 30 मिनट तक इनक्यूबेट करै।

② सीलिंग प्लेट फिल्म को खोलें, प्लेट अच्छी तरह से घोल को हिलाओ, हर कुएं म 300μl कामकाजी एकाग्रता धोने का तरल जोड़ें, और फिर कुँए म तरल को फेंक द । उपरोक्त चरणन का 5 बार दोहरावा, अउर अंत मा एक साफ अवशोषक कागज मा सूखा पैट करा।

③ 100μl एंजाइम संयुग्मित हर कुएं म संयु त, प्लेट को ढकते ह, और 45 मिनट तक 37 डिग्री पर इनक्यूबेट कर ।

④ सीलिंग प्लेट फिलिम खोलें, प्लेट मा घोल का अच्छा से हिलाओ, हर कुएं मा 300μl कामकाजी एकाग्रता धोवै का तरल जोड़ौ, अउर फिर कुँए मा तरल पदार्थ का फेंक दौ। उपरोक्त चरणन का 5 बार दोहरावा, अउर अंत मा एक साफ अवशोषक कागज मा सूखा पैट करा।

⑤ प्रत्येक कुएं को 100μl सब्सट्रेट घोल डालें, प्लेट को ढँक लें और 37 डिग्री पर 10 मिनट तक प्रकाश से दूर 10 मिनट तक इनक्यूबेट करें।

⑥ हर कुएं के लिए 50μl स्टॉप समाधान, और 5 मिनट के भीतर परिणाम का निर्धारण करें।

 

स्टेप 2 परिणाम व्याख्या

 

हर कुएं का OD450 मान 96-कुएं माइक्रोप्लेट रीडर पर पढ़ा गया।

2.1 सत्यापन

नकारात्मक नियंत्रण का औसत OD450nm मान रहा<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥3, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.

2.2 गणना विधि

हर नमूने के लए, सही नमूना और नयं ण मान का उपयोग करके न न ल खत एस / पी का गणना करते ह:

2.3 रिजल्ट व्याख्या

जब एस / पी<0.25, it is judged as negative.

जब एस / पी 0.35 से ज्यादा या बराबर या बराबर, तो इसे सकारात्मक रूप से आंका जात है।

जब एस / पी से 0.25 कम या बराबर<0.35, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.

 

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