पोरसिन परवोवायरस एंटीबॉडी एलिसा किट

बिनाई

 

 

परीक्षण प्रक्रिया एवं व्याख्यान

 

चरण 1 परीक्षण प्रक्रिया

1.1 वाश समाधान तैयारी म

Wयोग्य एकाग्रता wलाश तरल:उपयोग से पहिले धोवै के घोल का कमरा के तापमान (20-25 डिग्री) मा बहाल करै का चाही अउर समान रूप से हिलावा जाय जेहिसे कि ई एक समान बनावा जाय। तब 20 बार पतला पानी के साथ केंद्रित धोने का घोल (उदाहरण के लए, 95ml शुद्ध पानी म 5ml केंद्रित वाशिंग समाधान जोड़ा जात है), अच्छा से मिलाया जात है, और पतला धोने के तरल पदार्थ 7 दिन तक 2-8 डिग्री पर संग्रहीत किया जा सकत है।

1.2 नमूना तैयारी

① थोक पशु खून लीन गा, 10 मिनट तक 4000rpm पर सेंट्रीफ्यूज कीन गा, अउर सुपरनेटेंट एकत्रित कीन गा। सीरम को भी हेमोलिसिस के बिना प्राकृतिक रूप से सहगंबद्ध किया जा सकत है।

② सीरम को सीरम पतलापन प्लेट म 10 बार पतला करना पतला (उदाहरण के लए: सीरम का 15ul को 135ul नमूना पतला म परी ण कया जाना है)।

नोट: नकारात्मक अउर सकारात्मक नियंत्रणन का पतला करै के जरूरत नाहीं है।

1.3 परीक्षण प्रक्रिया

‐ एंजाइम लेबल को माइक्रोप्लाट (प्रमूल के संख्या के अनुसार, कई बार डिसएसेम्बल किया जा सकता है और उपयोग कया जा सकता है), एंजाइम लेबल म 100ul को पतला सीरम जोड़कर माइक्रोप्लाट म जोड़ना, नकारात्मक नियंत्रण और सकारात्मक नियंत्रण के लए दो कुंआ सेट कर, और क्रमशः 100ul को अच्छी तरह से जोड़ द । धीरे से नमूना कुअँम मा हिलावा, सीलिंग प्लेट फिलिम का इस्तेमाल कइके प्लेट का कवर करै, अउर 37 डिग्री मा 30 मिनट तक इनक्यूबेट करै।

② सीलिंग प्लेट फिल्म को खोलें, प्लेट अच्छी तरह से घोल को हिलाओ, हर कुएं म 300μl कामकाजी एकाग्रता धोने का तरल जोड़ें, और फिर कुँए म तरल को फेंक द । उपरोक्त चरणन का 5 बार दोहरावा, अउर अंत मा एक साफ अवशोषक कागज मा सूखा पैट करा।

③ 100μl एंजाइम संयुग्मित हर कुएं म संयु त, प्लेट को ढँकय, और 37 डिग्री पर 30 मिनट तक इनक्यूबेट कर।

④ सीलिंग प्लेट फिलिम खोलें, प्लेट मा घोल का अच्छा से हिलाओ, हर कुएं मा 300μl कामकाजी एकाग्रता धोवै का तरल जोड़ौ, अउर फिर कुँए मा तरल पदार्थ का फेंक दौ। उपरोक्त चरणन का 5 बार दोहरावा, अउर अंत मा एक साफ अवशोषक कागज मा सूखा पैट करा।

⑤ प्रत्येक कुएं को 100μl सब्सट्रेट घोल डालें, प्लेट को ढँक लें और 37 डिग्री पर 10 मिनट तक प्रकाश से दूर 10 मिनट तक इनक्यूबेट करें।

⑥ हर कुएं के लिए 50μl स्टॉप समाधान, और 5 मिनट के भीतर परिणाम का निर्धारण करें।

 

स्टेप 2 परिणाम व्याख्या

 

हर कुएं का OD450 मान 96-कुएं माइक्रोप्लेट रीडर पर पढ़ा गया।

2.1 सत्यापन

नकारात्मक नियंत्रण का औसत OD450nm मान < 0.2 रहा अउर सकारात्मक नियंत्रण का औसत OD450nm मान 0.7 से ग्रेटर रहा या बराबर रहा, प्रयोगात्मक परिणाम मान्य रहा। वरना परीक्षण दोहरावै का चाही।

2.2 गणना विधि

हर नमूने के लए, सही नमूना और नयं ण मान का उपयोग करके न न ल खत के रूप म एस / पी का गणना:

2.3 रिजल्ट व्याख्या

जब एस / पी < 0.25, तो इसे नकारात्मक के रूप म आंका जात है।

जब एस / पी > 0.3, तो इसे पॉजिटिव के रूप म...

जब 0.25 से कम या 0.3 से कम या बराबर या बराबर, यह संदिग्ध के रूप म आंका जात है, और एक सप्ताह बाद नमूनाकरण और परीक्षण करना सुझाव देत है।

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